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YS527C-SU-DHL-10淋巴瘤細胞人B細胞ATCC

2025-07-24

產      地:
中國
所在地區:
上海上海市
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細胞名稱:SU-DHL-10淋巴瘤細胞人B細胞ATCC

細胞代次:P4

細胞規格:T25瓶(包郵)/2冷凍管(需加干冰運輸費)

細胞凍存:無血清凍存液

細胞傳代:第一次建議1:2

細胞收到后處理

培養至良好狀態后灌滿培養液并封好瓶口是運輸細胞的最好辦法。收到細胞用75%酒精噴灑整個細胞消毒后放到超凈臺內嚴格無菌操作將細胞瓶放入37℃、5%CO2的培養箱中靜置3-4小時以穩定細胞狀態后再做處理。顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數拍照保存(最好40x,100x,200x各一張)前三天照片重要售后依據,不提供照片默認收到狀態良好。注意密封培養瓶放入培養箱時要將蓋子擰松,傳代后建議一瓶用原瓶的培養基,另外一瓶用自己配的培養基,以便進行對比培養

培養步驟

細胞傳代如果未超過80%匯合度時,將瓶裝的培養液收集至離心管中,留5ml培養基,放入37℃、5%CO2孵箱培養;如果細胞密度80%,即可進行傳代培養傳代具體步驟如下細胞傳代:

A1、對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:

方法一:收集細胞,1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄上清液,補加1-2ml培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或瓶中。

方法:可選擇半數換液方式,棄半數培養基后,將剩余細胞懸起,將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養基新皿中或者瓶中。

A2、懸浮細胞凍存:

1、細胞生長至覆蓋培養瓶的80%面積時,將T25 培養瓶中的懸液收集至離心管中1000rpm

離心5min;

2、棄上清,沉淀細胞加入1ml/支的雅吉生物無血清凍存液(C7001),混勻后加入凍存管中。(如:凍一支,加入 1ml 無血清凍存液即可)

3、將凍存細胞直接放入-80℃冰箱即可;如后期要將細胞轉入液氮罐中,需在-80℃冰箱存

24 小時以上。

B1、對于貼壁細胞,傳代可參考如下方法:

1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 添加0.25%消化液約1-2ml至培養瓶中,置于37℃培養箱中消化1-2min,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加5ml以上培養基終止消化。

3.輕輕吹打細胞,使之脫落后吸出,然后將懸液轉移至15ml離心管中,1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養重懸

4. 將細胞懸液按1:2的比例進行分瓶傳代(兩個T25瓶),補充新的培養基至5-8ml/瓶最后放入到37℃、5%CO2的細胞培養箱中培養。

B2、貼壁細胞凍存:

1、細胞生長至覆蓋培養瓶的80%面積時,棄T25培養瓶中的培養液,用PBS清洗細胞一次;

2、添加0.25%消化液約1ml至培養瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后加入5ml培養液終止消化,再輕輕吹打細胞使之脫落,然后將懸液轉移至15ml離心管中,1000rpm離心 5min;

3、 棄上清,沉淀細胞加入1ml的雅吉生物無血清凍存液(貨號:C7001),混勻后加入凍存管中。

細胞復蘇:

1、從液氮中取出細胞凍存管(注意佩戴防護面具),快速將其置入 37℃水浴中解凍, 直至凍存管中無結晶,然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁;

2、將凍存管中的細胞移至含 5ml 培養基的15ml離心管中,1000rpm離心5min;

3、棄上清,沉淀用5ml培養基重懸,接種T25培養瓶,37℃,5%CO2細胞培養箱中培養;

4、第二天,換用新鮮培養基繼續培養。

ATCC.png

注意事項:有些細胞比較特殊,如貼壁不牢,在運輸過程中發生容易細胞脫落,這是正常現象。請將培養瓶所有培養液收集至離心管,1000rpm離心5min,收集上清作過渡培養(后期對比培養),沉淀加入消化液1-2ml,輕輕吹打,重懸,消化1-2分鐘后,加5ml培養基終止反應。再離心,棄上清,加1-2ml培養基重懸。然后按1:2比例進行分瓶傳代(兩個T25),補充新的培養基至5-8ml/瓶,最后放入37℃,5%CO2細胞培養箱中培養。

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