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YS527C-SU-DHL-10淋巴瘤細(xì)胞人B細(xì)胞ATCC

2025-07-23

產(chǎn)      地:
中國
所在地區(qū):
上海上海市
有效期還剩 366舉報(bào)該信息

細(xì)胞名稱:SU-DHL-10淋巴瘤細(xì)胞人B細(xì)胞ATCC

細(xì)胞代次:P4

細(xì)胞規(guī)格:T25瓶(包郵)/2冷凍管(需加干冰運(yùn)輸費(fèi))

細(xì)胞凍存:無血清凍存液

細(xì)胞傳代:第一次建議1:2

細(xì)胞收到后處理

培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿培養(yǎng)液并封好瓶口是運(yùn)輸細(xì)胞的最好辦法。收到細(xì)胞用75%酒精噴灑整個(gè)細(xì)胞消毒后放到超凈臺(tái)內(nèi)嚴(yán)格無菌操作,將細(xì)胞瓶放入37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中靜置3-4小時(shí)以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)后再做處理。顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照保存(最好40x,100x,200x各一張)前三天照片重要售后依據(jù),不提供照片默認(rèn)收到狀態(tài)良好。注意密封培養(yǎng)瓶放入培養(yǎng)箱時(shí)要將蓋子擰松,傳代后建議一瓶用原瓶的培養(yǎng)基,另外一瓶用自己配的培養(yǎng)基,以便進(jìn)行對(duì)比培養(yǎng)

培養(yǎng)步驟

細(xì)胞傳代如果未超過80%匯合度時(shí),將瓶裝的培養(yǎng)液收集至離心管中,留5ml培養(yǎng)基,放入37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng);如果細(xì)胞密度80%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)傳代具體步驟如下細(xì)胞傳代:

A1、對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:

方法一:收集細(xì)胞,1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄上清液,補(bǔ)加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中。

方法:可選擇半數(shù)換液方式,棄半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細(xì)胞懸起,將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中。

A2、懸浮細(xì)胞凍存:

1、細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時(shí),將T25 培養(yǎng)瓶中的懸液收集至離心管中1000rpm

離心5min;

2、棄上清,沉淀細(xì)胞加入1ml/支的雅吉生物無血清凍存液(C7001),混勻后加入凍存管中。(如:凍一支,加入 1ml 無血清凍存液即可)

3、將凍存細(xì)胞直接放入-80℃冰箱即可;如后期要將細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮罐中,需在-80℃冰箱存

24 小時(shí)以上。

B1、對(duì)于貼壁細(xì)胞,傳代可參考如下方法:

1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

2. 添加0.25%消化液約1-2ml至培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上培養(yǎng)基終止消化。

3.輕輕吹打細(xì)胞,使之脫落后吸出,然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)重懸。

4. 將細(xì)胞懸液按1:2的比例進(jìn)行分瓶傳代(兩個(gè)T25瓶),補(bǔ)充新的培養(yǎng)基至5-8ml/瓶,最后放入到37℃、5%CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

B2、貼壁細(xì)胞凍存:

1、細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時(shí),棄T25培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,用PBS清洗細(xì)胞一次;

2、添加0.25%消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后加入5ml培養(yǎng)液終止消化,再輕輕吹打細(xì)胞使之脫落,然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,1000rpm離心 5min;

3、 棄上清,沉淀細(xì)胞加入1ml的雅吉生物無血清凍存液(貨號(hào):C7001),混勻后加入凍存管中。

細(xì)胞復(fù)蘇:

1、從液氮中取出細(xì)胞凍存管(注意佩戴防護(hù)面具),快速將其置入 37℃水浴中解凍, 直至凍存管中無結(jié)晶,然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁;

2、將凍存管中的細(xì)胞移至含 5ml 培養(yǎng)基的15ml離心管中,1000rpm離心5min;

3、棄上清,沉淀用5ml培養(yǎng)基重懸,接種T25培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

4、第二天,換用新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

ATCC.png

注意事項(xiàng):有些細(xì)胞比較特殊,如貼壁不牢,在運(yùn)輸過程中發(fā)生容易細(xì)胞脫落,這是正?,F(xiàn)象。請(qǐng)將培養(yǎng)瓶所有培養(yǎng)液收集至離心管,1000rpm離心5min,收集上清作過渡培養(yǎng)(后期對(duì)比培養(yǎng)),沉淀加入消化液1-2ml,輕輕吹打,重懸,消化1-2分鐘后,加5ml培養(yǎng)基終止反應(yīng)。再離心,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基重懸。然后按1:2比例進(jìn)行分瓶傳代(兩個(gè)T25),補(bǔ)充新的培養(yǎng)基至5-8ml/瓶,最后放入37℃,5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

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