概述
KAPA NGS FFPE DNA QC 試劑盒在構建 NGS 文庫之前提供可靠的基于 qPCR 的人類 FFPE DNA 樣本鑒定和推薦輸入評估。每個試劑盒都包含優化的高性能 qPCR 主混合物、DNA QC 標準和預混形式的引物。引物針對人類長散在核元件 (LINE)，提供更高的靈敏度并最大限度地減少 QC 所需的樣本量。
與 DNA QC 標準相比，樣本質量通過對短擴增子和長擴增子的相對定量來評估。計算出的標準化質量分數 (Q 分數) 用于計算所需的樣本輸入量，這為高質量文庫制備提供了最大的可能性。使用該試劑盒生成的 Q 分數可用于預測文庫制備的結果并優化 FFPE DNA 樣本的文庫構建參數。
KAPA FFPE DNA QC 試劑盒已在 KAPA HyperPETE 組織 DNA 工作流程中驗證，但理論上可能與 KAPA HyperCap FFPET DNA 工作流程兼容。
KAPA NGS FFPE DNA QC 試劑盒的優勢
· 最大限度地提高受損 FFPE DNA 樣本的成功率
· 在一次測定中以最少的投入評估質量并推薦投入
· 通過靈活且易于自動化的工作流程節省寶貴的時間
KAPA NGS FFPE DNA QC 試劑盒的原理
KAPA NGS FFPE QC 試劑盒通過比較 LightCycler ® qPCR 檢測中較大 (191-bp) 擴增子和較小 (66 bp) 擴增子的擴增情況來評估樣本質量，該檢測使用針對人類長散在核元件 (LINE) 的引物。針對 LINE 元件可以從極少量的輸入 FFPET DNA 中產生更強的信號，從而獲得更靈敏的結果并很大程度地減少 QC 測試樣本的使用。這可以對質量進行可靠的評估，該質量評估是整個基因組的平均質量，而不是單拷貝的管家基因。此外，與分光光度法和電泳法相比，qPCR 檢測在評估樣本質量方面具有更高的靈敏度和準確性。
比較這兩個 qPCR 檢測的相對擴增結果可得出樣本的 Q 值，該 Q 值可與已知數量的 QC PCR DNA 標準進行比較，作為樣本質量的指標。然后可適當調整低質量樣本的輸入 DNA 量，以提高文庫制備成功的可能性。
最大限度地提高受損 FFPE DNA 樣本的成功率
質量調整輸入（Q 輸入）顯著改善了 KAPA HyperPETE 組織 DNA 工作流程中低質量 (LQ)、中等質量 (MQ) 甚至高質量 (HQ) FFPE DNA 樣本的測序覆蓋率指標。
圖 1 . 使用 KAPA NGS FFPE DNA QC Kit 的質量調整輸入，與未調整的 10 ng 輸入相比，KAPA HyperPETE Pan Cancer 和 Hot Spot Panels 的測序覆蓋率指標顯著提高。低質量 (LQ) FFPET DNA 樣本的標準化 Q 分數范圍為 0.042 至 0.2。在 KAPA HyperPETE 組織 DNA 工作流程中，質量調整（Q 調整）輸入范圍為 60 至 248 ng。
圖 2 . 質量調整輸入（Q 輸入）顯著提高了 KAPA HyperPETE 組織 DNA 工作流程中 KAPA HyperPETE Pan Cancer Panel 覆蓋的面板外顯子的百分比，提高了 500 倍或更多。與 10 ng 的覆蓋率相比，低質量樣本（LQ）顯示出明顯的改善。但是，中等質量（MQ）甚至高質量（HQ）樣本也可以通過使用 KAPA NGS FFPE DNA QC Kit 計算的 Q 輸入受益。
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