商品介紹：

以下是細胞生物學試劑的詳細介紹：

操作步驟：

1. 樣品染色

1) 將Binding Buffer（10×）稀釋成1×Binding buffer工作液備用（1ml Binding Buffer（10×）需加入9ml無菌去離子水）。

2) 對于懸浮細胞，500-1000g離心5min收集細胞。

對于貼壁細胞，要用不含EDTA的胰酶消化細胞，胰酶消化時間不宜過長或過短，最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時，加入細胞培養液，將細胞輕輕吹打下來，轉移到離心管內，500-1000g離心5min收集細胞。

3) 收集細胞后，加入預冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌，離心收集細胞，共洗滌兩次。

4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液，重懸細胞，使細胞濃度達到1×106 cell/ml。

5) 吸取100μl細胞懸液（細胞總數為1×105 cell）至一新管中，加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI，輕輕混勻，室溫避光孵育15min。

2. 樣品檢測

1) 流式細胞儀檢測：

染色孵育后，每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液，混勻后使用流式細胞儀檢測（1小時內檢測）。

建議設置經凋亡誘導的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組，正常細胞組可作為熒光補償調節去除光譜重疊和設定十字門的位置。結果可用CellQuest等軟件進行分析，繪制雙色散點圖（two-color dot plot），FITC為橫坐標，PI為縱坐標。Annexin V-FITC和PI聯合使用時，活細胞僅有很低強度的背景熒光，早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光，晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光。

2) 熒光顯微鏡檢測：

染色孵育后涂片，顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結合的細胞顯示漿膜上有綠色光環。喪失細胞膜完整性的細胞，細胞核顯示紅色，膜上有綠色光環。
公司產品僅用于科研細胞培養操作規程：

一．培養基及培養凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO)，90%；優質胎牛血清，10%。

2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

枯草芽孢桿菌Pseudomonas sp.兔乳鐵傳遞蛋白/乳鐵蛋白(LF/LTF)

羊毛鏈霉菌Curtobacterium sp.兔心肌特異性肌鈣蛋白T(c)

蘋果鏈格孢Vibrio sp.兔心肌特異性肌鈣蛋白T(c)

硬皮地星Paenibacillus sp.兔溶菌(LZM)

Trichococcus（可定）Vibrio sp.兔溶菌(LZM)

短小芽孢桿菌Listeria sp.兔子催乳(PRL)

菊異莖點霉Vibrio sp.兔子催乳(PRL)

草木棲劍菌Vibrio sp.兔子促黃體激(LH)

海唯鹽菌Vibrio sp.兔子促黃體激(LH)

新城疫病Rothia sp.兔抗腦組織抗體(ABAb)

孢小克銀漢霉輪生變種Rothia sp.兔抗腦組織抗體(ABAb)

黃斑紅菇Staphylococcus sp.兔p53(p53)

釀酒酵母Staphylococcus sp.兔p53(p53)

橙色微桿菌Staphylococcus sp.兔Bcl-2相關X蛋白(BAX)

弗氏檸檬桿菌Staphylococcus sp.兔Bcl-2相關X蛋白(BAX)

枯草芽孢桿菌Budvicia aquatica兔阿霉(ADR)

金屬蛋白組織抑制因子-4抗體解阿伯半乳聚糖微桿菌茄腐皮鐮孢

線粒體DNA拓普西異構Ⅰ抗體人參土地類芽孢桿菌青霉菌屬菌種

睪丸激孤兒受體相關蛋白抗體人參土噬幾丁質菌群山擬諾氏菌

生精細胞凋亡相關基因3抗體神戶類芽孢桿菌山丘鏈霉菌
IkappaB激酶(IKK)抑制劑(PS-1145)假絲酵母屬 糖化

脆泊氏孔 菠蘿蛋白

黑曲霉 高溫α-淀粉

黃曲霉 β-葡萄糖苷

釀酒酵母 半纖維

擬郎比可假絲酵母 α-淀粉（枯草桿）

水生布戴約維采 頭孢

釀酒酵母 乙酰肉堿轉移

紫色鏈霉 5'-磷酸二酯

麥氏交替單胞 過氧化氫

腸沙門氏腸亞種 乙酰酯（電鰻魚）

短小芽孢桿 肝III

微小桿 肝II

多主葡萄殼 肝Ⅰ

蘇云金芽孢桿 肝Ⅰ